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RNA提取原理

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提取rna时,加入氯仿,分为三层:水相(含有RNA,可能还有一点DNA),中间白色薄层(应该是蛋白质和DNA)和下层有机相(氯仿和蛋白质等)。).

氯仿是一种分子量相对较大的有机溶剂。提取RNA时,氯仿可以快速有效地将有机相与无机相分离。DNA提取过程中,苯酚和蛋白质主要在有机相中结合,使蛋白质和DNA分离,DNA进入水相。但在提取RNA的过程中,需要避免蛋白质和DNA的分离,否则DNA会释放到水相中。无论有无苯酚,氯仿本身对蛋白质有变性作用,容易使DNA的亲水基团与水相接触产生剧烈震荡。所以不要剧烈摇晃。

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用保护RNA或DNA链中的亲水基团,相当于沉淀,但这个反应发生在水相中,与氯仿并不矛盾。

细胞中有很多种不同功能的小RNA,如组成剪接体的SNRNAs,负责rRNA形成的snRNA,参与RNAi的miRNA和siRNA,可以调节基因表达。其他如I型和II型内含子、RNaseP、HDV、核糖体RNA等。具有催化生化反应的活性,即具有酶的活性,称为核酶。

RNA在各种生物活动中起着至关重要的作用。脱氧核糖没有2'-OH。RNA的2'-OH中的O(氧原子)在羟基(水)和氢结合时,可以在3 '碳原子以下的磷酸基团附近形成含有5个共价键的P(5 P-O)。

RNA和DNA是核酸,加上脂类、蛋白质和碳水化合物。核糖的2位碳与羟基相连是RNA的一个重要结构特征。这种羟基使得RNA双链的结构最接近A型构象。但在一些单链的二核苷酸环境中,极不可能形成DNA最常见的B型螺旋构象。

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